Cell Counting Kit-8 (CCK-8)試劑盒通過采用水溶性四唑鹽 WST-8 (化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)實(shí)現(xiàn)快速檢測，其原理是 WST-8在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成橙黃色的甲臜染料（formazan）。通過比色，可以動(dòng)態(tài)地量化活細(xì)胞的數(shù)量，從而對細(xì)胞增殖或藥物毒性進(jìn)行檢測。CCK-8溶液可直接加入到細(xì)胞中，不需要與其它組分預(yù)混，操作方便，檢測準(zhǔn)確。

檢測原理：

Cell Counting Kit-8 (CCK-8)是一種氧化還原反應(yīng)的指示劑，在電子載體1-Methoxy PMS存在的條件下，利用活細(xì)胞中的脫氫酶催化四唑鹽WST-8生成甲臜染料，而且甲臜染料的生成量與活細(xì)胞的數(shù)量成線性關(guān)系。

產(chǎn)品優(yōu)勢：

1、CCK-8的檢測靈敏度高于其他方法，如MTT，XTT或WST-1；

2、操作更簡單，無需有機(jī)溶劑；

3、對細(xì)胞無毒性；

4、穩(wěn)定的試劑，即開即用。

應(yīng)用領(lǐng)域：

細(xì)胞增殖測定；細(xì)胞活力檢測；細(xì)胞因子實(shí)驗(yàn)；細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)

存儲條件：

4℃避光可保存一年，-20℃避光可保存兩年。

操作說明：

1. 接種細(xì)胞懸液100μL 于96孔板，在細(xì)胞培養(yǎng)箱中（37°C, 5% CO2）孵育。

2. 取出需要檢測的細(xì)胞，于細(xì)胞培養(yǎng)液中直接加入1/10體積的Cell Counting Kit-8 (CCK-8)，充分混合，保證孔中顏色均一性，但不可有氣泡產(chǎn)生。對96孔板，每 100μl培養(yǎng)液加入10μl檢測試劑。

3. 繼續(xù)于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1-4小時(shí)。

4. 酶標(biāo)儀讀數(shù)之前，置于孔板于搖床振蕩上約1min，確保孔板顏色均勻。

5. 用酶標(biāo)儀讀取450nm光吸收值，計(jì)算細(xì)胞活性。

細(xì)胞存活率=[(實(shí)驗(yàn)組-空白組) / (對照組-空白組)] × 100%

細(xì)胞抑制率=[(對照組-實(shí)驗(yàn)組) / (對照組-空白組)] × 100%

實(shí)驗(yàn)組：含細(xì)胞、培養(yǎng)基、CCK-8和藥物；

對照組：含細(xì)胞、培養(yǎng)基、CCK-8，不含藥物；

空白組：含培養(yǎng)基、CCK-8，不含細(xì)胞、藥物。

6. 可選步驟：在100μl細(xì)胞中加入10 μl 3 % SDS 以終止反應(yīng)，可在3天內(nèi)讀取數(shù)據(jù)。

注意事項(xiàng)：

1、使用前請充分混勻，避免反復(fù)凍融

2、96孔板注意邊緣效應(yīng)，建議棄用周圍一圈板孔，改加相同量的PBS。

3、本產(chǎn)品只能用于研究，嚴(yán)禁用于人體。